ИКСИ (ICSI) - интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида

ИКСИ (ICSI) - интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида

ICSI IntraСytoplasmic Sperm Injection
PZD Partial Zona Dissection
SUZI Sub-Zonal Insemination

За последние несколько лет в лечении мужского бесплодия достигнут значительный прогресс, связанный с внедрением в практику метода интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ).
Этот революционный подход позволяет иметь потомство мужчинам с тяжелыми формами олиго-,астено-, терато- и даже азооспермии.

Предшественниками можно считать такие микроманипуляционные методы, как частичное иссчение блестящей оболочки zona pellucida (PZD), и инъекция сперматозоидов под блестящую оболочку zona pellucida (SUZI), которые до внедрения ИКСИ применялись при плохих характеристиках спермы. Эти методы облегчали проникновение сперматозоида в клетку, однако при этом возрастала частота полиспермии.

При ИКСИ можно быть уверенным, что в ооплазму попадет лишь один сперматозоид. предварительно отобранный по морфологическим и другим характеристикам.

Впервые беременность после ИКСИ была получена в 1993 году в группе Van Stertenghem(Бельгия). В настоящее время метод широко применяется во всем мире.

Метод ИКСИ базируется на программе ЭКО и ПЭ, являясь одним из вариантов проведения оплодотворения in vitro.

В отличие от стандартной программы ЭКО, для успеха которой требуется большое количество сперматазоидов, при ИКСИ в цитоплазму ооцита вводится лишь один сперматозоид, поэтому качество спермы, как правило, не оказывает влияния на частоту оплодотворения и последующего дробления.

Подготовка спермы для ИКСИ

Приготовление спермы для ИКСИ не отличается от такового для обычного ЭКО, однако , в случае очень низкой концентрации сперматозоидов в эякуляте либо при их получении непосредственно из яичка (эпидидимиса) рекомендуется ограничиваться однократной отмывкой (центрифугированием) ооцитов в среде без флотации, причем сперматозоиды в этом случае достают из осадка.

Место встречи

Процедура ИКСИ проводится в чашке Петри диаметром 30-60 мм с низкими бортиками.На дно чашки помещают капли со средой , предназначенной для работы с ооцитами и эмбрионами в условиях вне инкубатора. Число капель соответствует количеству ооцитов, полученных у пациентки, объем 1-2 мкл. Помимо этого в чашке формируют 1-2 плоские капли поливинлпирролидона(PVP), замедляющего движение сперматозоидов. Затем поверх капель наливают минеральное масло, предохраняющее их от высыхания.

ИКСИ проводят только на зрелых ооцитах. Однако большинство незрелых ооцитов может дозреть в условиях in vitro. Оценку зрелости визуально проводит эмбриолог. Все зрелые на момент проведения ИКСИ ооциты помещают в капли среды под масло, обработанная сперма добавляется в капли с PVP. Концентрация сперматазоидов в капле не должна быть слишком высокой. т.к. это затрудняет работу эмбриолога. Скорость движения сперматозоидов в PVP снижается в 2-3 раза, что облегчает манипуляции с ними.

Выбор сперматазоида для ИКСИ

- непростая задача. Большинство исследователей склоняется к тому, что надо брать прогрессивно подвижный сперматозоид с нормальной морфологией, оцененной по строгому критерию Крюгера. Однако такой подход не основан на глубоком анализе,а является эмпирическим. Подвижность сперматазоида характеризует его жизнеспособность. А отклонения от нормальной морфологии не являются прямым отражением изменений хромосомного характера.

Этапы процедуры ИКСИ

1. иммобилизация сперматазоида

-важно обездвижить сперматозоид путем неполного перетирания его хвоста о дно чашки Петри.
Полагают, что нарушение целостности мембраны спематазоида способствует проникновению в ооцит факторов, ответственных за активацию ооцита.

2. засасывание сперматазоида в специальную иглу

на этом этапе важно отследить, чтобы первым в пипетку зашел хвост сперматозоида.

3. закрепление ооцита на присоске

таким образом, чтобы полярное тело находилось в положении 6 или 12 час.
Т акое положение считается общепринятым, т.к. на приколе 3 часа метафазная пластинка, находящаяся под полярным тельцем, подвергается наименьшему риску повреждения. Однако, есть мнения, что 7 и 11 часов -оптимальные положения. В этом случае наблюдалась наибольшая частота оплодотворения и дробления. При перемещении прикола в положение 9 часов, оплодотворения практически не наблюдалось, что объяснялось большим риском повреждения хромосомного материала ооцита.

4. прокол ооцита и отсасывание небольшого количества ооплазмы

проводят для констатации проникновения иглы в ооцит и целостности мембраны.

5. инъекция сперматозоида вместе с ооплазмой.

По окончании ИКСИ ооциты как можно скорее переносят в культуральную среду и культивируют в дальнейшем также, как после обычного оплодотворения in vitro.

Параметры успешного ИКСИ

Сперматозоиды, полученные из яичка обладают такой же оплодотворяющей способностью, как и полученные из эякулята. Только при двух, достаточно редких состояниях -отсутствии подвижных сперматозоидов и глобозооспермии, частота оплодотворения и беременности после ИКСИ резко падает.

Наступление беременности после ИКСИ не зависит от степени тяжести мужского бесплодия, не выявлено и влияния количества, подвижности и морфологии сперматазоидов, а также наличия в сперме антиспермальных антител.

Генетический риск ИКСИ

Наиболее сложной проблемой медицинского и этического характера , возникающей при применении ИКСи для лечения тяжелого мужского бесплодия, является возможность передачи потомству дефектных генов. В свете этого остро стоит вопрос о предварительном генетическом скрининге, дающем возможность определить вероятность передачи потомству имеющихся аномалий.

Основные группы мутаций, ответственные за мужское бесплодие

Сама процедура ИКСИ не способна привести к возникновению нарушений у потомства. Тяжелый генетический груз, привносимый бесплодными родителями, не может не сказаться на здоровье, особенно репродуктивном , будущих поколений.

Наиболее перспективным шагом в этом направлении стало постепенное внедрение в мире метода преимплантационной генетической диагностики, состоящей в анализе конкретного эмбриона на стадии 6 и более бластомеров на предмет хромосомных или генных мутаций.

Источник:
Б.В. Леонов, А.А.Беляева, Л.Н. Кузьмичев, Ю.Е. Мосесова
"Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида-новый подход к лечению мужского бесплодия"

Влияние индивидуальных морфологических характеристик спермы на исход ИКСИ

Индивидуальные морфологические характеристики сперматозоидов в момент инъекции коррелируют с частотой оплодотворения. Использование в ИКСИ сперматозоидов с аморфной головкой и сломанной шейкой наименее результативно. Однако морфология инъецированных сперматозоидов не влияет на развитие эмбриона в том случае, если оплодотворение прошло успешно.